【预期用途】
口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)感染引起的偶蹄动物共患的急性、热性、接触性传染病。在猪的预防免疫工作中,值得关注的就是强化免疫的接种时机问题。在过高的抗体水平进行免疫,过高的抗体水平还会中和疫苗,影响疫苗的免疫效果,导致免疫失败;在较低的抗体水平进行免疫,又会出现抗体保护真空期,威胁猪的健康。
本试剂盒检测反映抗体水平,利于指导免疫时机。用于检测猪血清中口蹄疫O型病毒的抗体,不能用于区分口蹄疫野毒感染猪和用疫苗免疫猪。
【原 理】
本试剂盒系由预包被猪口蹄疫病毒O型(OZK/93株+OS/99株)VP1表位多肽抗原的微孔板和酶标记二抗及其他配套试剂组成,应用酶联免疫法(ELISA)原理检测猪血清或血浆中口蹄疫病毒特异性抗体。实验时,在包被板中加入对照血清和稀释的待检血清,经温育后,若样品中含有口蹄疫病毒的特异性抗体,则将与包被板上抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后;再加入酶标二抗,与包被板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶结合物,在孔中加TMB底物液,与酶反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有特异性抗体。
【试剂盒组成】
1 . | 口蹄疫病毒抗原预包被微孔板条 | 96T×1 |
2. | 酶标记物 (红盖) | 11ml×1 |
3. | 样品稀释液 (黄盖) | 25ml×1 |
4. | 20X浓缩洗涤液 (透明盖) | 20ml×1 |
5. | 底物液A (白盖) | 6ml×1 |
6. | 底物液B (黑盖) | 6ml×1 |
7. | 终止液 (黄盖) | 6ml×1 |
8. | 阳性对照 (红盖,已灭活) | 0.5ml×1 |
9. | 阴性对照 (绿盖,已灭活) | 0.5ml×1 |
10. | 盖板膜 | 1张 |
11. | 自封袋 | 1个 |
12. | 说明书 | 1份 |
【样品制备】 取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染。样品短期可于2~8℃保存,长期需置-20℃保存。
【样品稀释】 用样品稀释液将待检血清按40倍稀释(如5μl血清加入195μl样品稀释液中,混匀)。阴、阳性对照不用稀释。
【试验操作方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。
2.取所需用量包被微孔板条,设空白、阴性及阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。
3.阴性、阳性对照孔分别加入阴性、阳性对照血清100μl;样品孔每孔加入稀释后的血清样本100μl;空白对照孔不加。
4.混匀,置37℃反应30分钟。
5.扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。
6.每孔加酶标记物100μl(空白孔除外)。置37℃反应30分钟。
7.洗涤,同步骤5。
8.每孔依次加显色剂A、显色剂B各50μl,混匀,37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl,混匀,用空白孔调零,于450nm(630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A)。
【洗涤液配制】浓缩洗涤液使用前应恢复至室温(25℃左右),并摇动使沉淀的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。
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