抗CCP抗体与RF联合检测诊断类风湿关节炎的价值

【摘要】  目的 探讨联合检测抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体和类风湿因子（RF）诊断类风湿关节炎(RA)的价值,并了解抗CCP抗体与RF之间的相关性。方法 采用ELISA法和乳胶增强免疫比浊法，检测79例RA、52例非RA病人血清抗CCP抗体和RF。结果 79例RA病人中单一抗CCP抗体阳性12例，单一RF阳性20例，两项同时阳性40例，同时阴性7例，一致率为59.5%（47/79）。52例非RA病人中单一抗CCP抗体阳性2例，单一RF阳性14例，无1例两项同时阳性。RA病人抗CCP抗体与RF阳性率显著高于非RA病人（χ2=49.713、30.666，P<0.01），RF阳性率高于抗CCP抗体，但差异无显著性（P>0.05）；非RA病人RF阳性率显著高于抗CCP抗体（χ2=10.636，P<0.01）。抗CCP抗体诊断RA的特异度和阳性预测值分别为96.2%、96.3%，灵敏度为65.8%。抗CCP抗体和RF联合检测诊断RA的灵敏度、阴性预测值及准确度分别为91.1%、83.7%、82.4 %。抗CCP抗体与RF无相关性（P>0.05）。结论 抗CCP抗体诊断RA具有满意的特异度及很高的阳性预测值，对RA有较高诊断价值。抗CCP抗体与RF联合检测更有助于RA的临床诊断。

【关键词】  关节炎 类风湿 抗环瓜氨酸肽抗体 类风湿因子 酶联免疫吸附测定

    COMBINATION DETECTION OF SERUM ANTICYCLIC CITRULLINATED PEPTIDE ANTIBODY AND RHEUMATOID FACTOR: ITS DIAGNOSTIC VALUE OF RHEUMATOID ARTHRITISCHEN HUALI, YANG WENDONG, HAN JINGYIN(Department of Clinical Laboratory, The People’s Hospital of Dongying, Dongying  257091, China) ［ABSTRACT］ob[x]jectiveTo evaluate the diagnostic value of serum  anticyclic citrullinated peptide antibody (antiCCP) and rheumatoid factor (RF) in patients with rheumatoid arthritis (RA).MethodsELISA and TPNIA techniques were used to detect serum levels of antiCCP and RF in 79 patients with RA and 52 nonRA patients.ResultsPositive  antiCCP and RF were found in 40 patients with RA, while positive antiCCP or RF alone was found in 12 or 20 with RA,respectively. Positive antiCCP or RF alone was only noticed in two or 14 nonRA patients, respectively. Both antiCCP and RF positive were not observed in nonRA patients. The positive rate of antiCCP and RF of patients with RA was significantly higher than that of nonRA patients (χ2=49.713,30.666；P<0.01).ConclusionDetermination of serum levels of antiCCP by ELISA, with relatively high accuracy and specificity, is helpful in the diagnosis of patients with RA.

    ［KEY WORDS］arthritis, rheumatoidl; anticyclic citrullinated peptide antibody; rheumatoid factor; enzymeli[x]nked immunosorbent assay

    类风湿关节炎(RA)是一种常见的以关节滑膜组织慢性炎症病变为主要表现的自身免疫性疾病（AID）[1]。其病理特征为慢性滑膜炎侵及下层的软骨和骨组织，造成关节破坏。RA是导致人群丧失劳动力和致残的主要病因之一，因此RA的早期诊断尤其重要。目前RA诊断主要依靠临床表现、X线改变和类风湿因子(RF)检测，因RF缺乏特异性[2]，不利于早期诊断、早期治疗。2000年,荷兰学者SCHELLEKENS等[2]报道将人工合成的环瓜氨酸肽(CCP)作为抗原，用ELISA方法检测RA病人血清抗CCP抗体，结果显示抗CCP抗体有较好的灵敏度（68%）和很高的特异度（98%）。近年来国内学者的研究结果也证实了抗CCP抗体对RA具有较高的诊断价值[3,4]。本研究旨在探讨抗CCP抗体与RF联合检测在RA诊断中的临床价值,为RA的早期诊断提供帮助。

    1  对象与方法

    1.1  研究对象

    2004年6月～2006年12月，我院门诊及住院的RA病人79例,均符合美国风湿病学会1987年修订的RA分类标准[5]。非RA病人共52例,其中系统性红斑狼疮（SLE）17例,干燥综合征（SS）14例，混合结缔组织病（MCTD）9例，强直性脊柱炎（GS）及骨关节炎（OA）各6例。

    1.2  标本采集

    所有对象均于晨起抽取肘静脉血3 mL，自然凝固后分离血清置于-20 ℃低温保存待测。

    1.3  检测方法

    血清 RF 定量测定采用胶乳增强免疫透射比浊法，由深圳迈瑞BS300全自动生化分析仪测定，试剂盒由上海捷门生物技术合作公司提供。线性范围：5～80 kU/L，正常参考范围：0～20 kU/L。

    血清抗CCP抗体测定采用ELISA法，抗CCP IgG型抗体由德国欧蒙公司提供，严格按说明书操作。标本作1∶100稀释，充分混匀。按加样顺序向相应微量盘内分别加入标准血清、参考质控、稀释后的阴阳性对照、稀释后的标本各100 μL，微孔是用已知cDNA序列人工合成的CCP抗原包被的。室温(18～25 ℃)温育60 min。洗板3次后每孔加入酶结合物100 μL(碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体),室温温育30 min。再次洗板后,每孔加入酶底物100 μL,室温下避光温育30 min。以与加底物时相同的次序和速度滴加100 μL终止液（2 mol/L硫酸）至微孔中终止反应（60 min内完成比色）。使用酶标仪于450 nm波长处比色,读取吸光度（A）值，计算出抗CCP抗体浓度。以cut off值5 kU/L作为正常范围上限。相同反应条件下不同板间同一阳性标准血清A值相同偏差波动≤5%。酶标仪为芬兰产Multiskan MK3酶标仪。

    1.4  统计学处理

    率的比较采用χ2检验。抗CCP抗体和RF之间的相关性采用Spearman检验。

    2  结    果

    RA组79例中单一抗CCP抗体阳性12例，单一RF阳性20例，两项同时阳性40例，同时阴性7例，一致率为59.5%（47/79）。非RA组52例中单一抗CCP抗体阳性2例，单一RF阳性14例，无1例两项同时阳性。

    2.1  抗CCP抗体与RF阳性率的比较

    RA病人抗CCP抗体、RF阳性率分别为65.8%、75.9%，非RA病人分别为3.8%、26.9%，RA病人抗CCP抗体与RF阳性率均显著高于非RA病人（χ2=49.713、30.666，P<0.01）。RA病人RF阳性率高于抗CCP抗体，但差异无显著意义（P>0.05）；非RA病人RF阳性率显著高于抗CCP抗体（χ2=10.636，P<0.01）。

    2.2  抗CCP抗体、RF对诊断价值

    抗CCP抗体检测具有较高的特异度和阳性预测值，抗CCP抗体和RF联合检测具有较高的灵敏度、阴性预测值及准确度。见表1。

    2.3  RA病人抗CCP抗体与RF的相关性

    抗CCP抗体与RF无相关性（P>0.05），见表2。 表1  抗CCP抗体、RF对RA的诊断价值表2  RA病人抗CCP抗体与RF的相关性（例）抗CCP抗体RF阳性阴性合计阳性401252阴性20727

    3  讨    论

    RA早期诊断、早期治疗可控制病情,减少关节的破坏,改善预后。国内外诊断该病均参照1987年美国风湿病学会RA的分类标准,即7项分类标准中有4项符合可诊断为RA。此分类标准除临床表现外还有X线、血清RF检查，此标准不能早期诊断RA。RF是抗IgG分子Fc片段的自身抗体,按免疫球蛋白类型可分为IgM型、IgG型和IgA型等。它见于70%的RA病人,但RF阳性也出现在系统性红斑狼疮、原发性干燥综合征、慢性肺结核、恶性肿瘤等其他疾病, 甚至正常人中也有一定的阳性率[6]。本研究有12例RA病人血清RF阴性，抗CCP抗体检测为阳性；有20例RF阳性的病人抗CCP抗体检测阴性。RF灵敏度（75.9%）较抗CCP抗体（65.8%）高，但其特异度低。在非RA病人中检测到的RF阳性率为26.9%。因此，RF是诊断RA的一个敏感但不很特异的指标，RF用于RA的早期诊断有一定的局限性[7]。

    抗CCP 抗体的靶抗原为细胞基质聚角蛋白的微丝蛋白,CCP是该抗原的主要成分。用ELISA法检测抗CCP抗体使用的抗原为新研制的人工合成的高纯度的CCP。本研究对97例RA病人行抗CCP抗体检测的特异度为96.2%，与有关文献结果基本一致[8]。但是国内外普遍认为抗CCP抗体的灵敏度较低，仅为41%～68%。原因可能是每个病人血清中含有抗体的亚群不同,而且检测所使用的合成肽不能完全代表目前仍未知的抗原决定簇，本研究检测抗CCP抗体的灵敏度仅为65.8%。但显著高于非RA组（3.8%），说明抗CCP抗体为RA的特异抗体。抗CCP抗体诊断RA的阳性预测值和阴性预测值分别为96.3%和64.9%。在79例RA病人血清中抗CCP抗体与RF一致率为59.5%，经Spearman检验两者之间不存在明显相关性。抗CCP抗体与RF联合平行试验的灵敏度、特异度分别为91.1%和69.2%，准确度提高到82.4%。抗CCP抗体具有很高的特异性，RF有良好的敏感性，抗CCP抗体与RF联合检测较RF单一检测能够提高灵敏度、阳性预测值、阴性预测值和准确度，但降低了特异度。联合检测比单项检测更具有早期诊断的优势，因其阳性预测值可大大提高，将有助于RA的早期诊断。

    综上所述，抗CCP抗体具有满意的特异度及很高的阳性预测值，但其灵敏度较低,致使部分病人漏诊,对近期发生的关节炎，应联合检测RF和抗CCP抗体，以早期诊断RA。

【参考文献】
  [1]姜波,吴红,陈世锋,等. 可溶性黏附分子与风湿免疫性疾病[J]. 齐鲁医学杂志, 2006,21(3)：270272.

[2]SCHELLEKENS G A, VISSER H, DE JONG B A W, et al. The diagnostic properties of rheumatoid arthritis antibodies,recognizing a cyclic citrullinated peptide[J]. Arthritis Rheum, 2000,43(1):155163.

[3]潘解萍,谢雯,吴敏,等. 抗环瓜氨酸肽抗体在类风湿关节炎早期诊断中的临床意义[J]. 江苏医药, 2006,32:(1):6869.

[4]张松照,黄洪,张颖,等. 类风湿性关节炎患者抗环瓜氨酸肽抗体的临床应用[J]. 上海医学, 2005,28:(12):10401043.

[5]ARNETT F C, EDWORTHY S M, BLOCH D A, et al. The American rheumatism association 1987 revised criteria for the　classification of rheumatoid[J]. Arthritis Rheum, 1988,31(2)：315324.

[6]MEDIWAKE R, ISENBERG D A, SCHELLEKENS G A, et al. Use of anticitrullinatce peptide and anti RA33 antibodies in distinguishing erosive arthritis in patients with systemic lupus erythematosus and rheumatoid arthritis[J]. Ann Rheum Dis, 2001,60(1):6768.

[7]VINCENT C, SIMON M, SEBBAG M, et al. Immunoblotting detection of autoantibodies to human epidermis filaggrin: a new diagnostic test for rheumatoid arthritis[J]. J Rheum Atoll, 1998,25:838846.

[8]NICOLA B, GIOVANNI M, ELIO S, et al. Diagnostic accuracy of the anticitrulline antibody assay for rheumatoid arthritis[J]. Clin Chem, 2001,47(5):10891093.

作者：陈华丽

作者单位：东营市人民医院检验科，山东 东营 257091