肝硬化患者血清中细胞因子的检测及其临床意义

　作者：刘镇平,江远　　作者单位：广东省深圳市宝安区沙井人民医院， 广东 深圳 518104

　　【摘要】目的：探讨肝炎后肝硬化(posthepatitic cirrhosis，PHC)患者血清中细胞因子的水平变化及其与肝功能的关系。方法：采用ELISA法测定58例PHC患者和35例健康者血清细胞因子IL-6、IL-8、TNF-a的水平。同时将肝硬化患者按Child-Pugh肝功能分级标准分成A、B、C三组。结果：肝硬化组IL-6、IL-8、TNF-a的水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01);Child-Pugh A、B、C三级的IL-6、IL-8、TNF-a水平依次递增，且各级间差异有统计学意义(P<0.01)。结论：随着IL-6、IL-8、TNF-a血清水平的升高而肝损伤程度加重，采用IL-6、IL-8、TNF-a作为临床判断肝脏损害程度的指标具有较好的临床参考价值。

　　【关键词】 肝硬化; 细胞因子; ELISA

　　Detection and Clinical Significance of the Cytokines in the　Serum of Patients with Hepatic Cirrhosis

　　LIU Zhen-ping, JIANG Yuan

　　(Shajing People's Hospital of Shenzhen Baoan,

　　Guangdong Shenzhen 518104, China)

　　Abstract： ob[x]jective:To explore the serum levels of cytokines of patients with posthepatitil cirrhosis (HPC) and the relationship between the cytokines and liver function. Method：Using ELISA technique to measure the serum levels of IL-6、IL-8、TNF-a in 58 patients with posthepatitic cirrhosis(PHC) and 35 healthy peoples. The patients with posthepatitic cirrhosis(PHC) were classified by A、B、C groups according to the standard of child-pugh. Result：The serum levels of IL-6、IL-8 and TNF-α of patients with PHC were significantly higher than those in healthy control group (P<0.01). The serum levels of IL-6、IL-8 and TNF-α of Child-Pugh A、B、C groups were significantly higher than those in healthy groups. Conclusion：With the increase of the serum levels of IL-6、IL-8 and TNF-α, liver damage was aggravated, which indicated that there is an impediment in immune function and it is closely related to liver function. So it is of clinically value to adopt the serum levels of IL-6、IL-8 and TNF-α as an indicator to determine the degree to liver damage.

　　Key words： Hepatic cirrhosis; Cytokine; ELISA

　　近年来，大量的研究表明，肝硬化患者血清中细胞因子的含量升高，并且这些细胞因子水平的升高与肝硬化病情严重程度有关[1,2]。因此，本文测定58例乙型肝炎后肝硬化(posthepatitic cirrhosis，PHC)患者血清IL-6、IL-8、TNF-a的水平及血清总胆红素(TBiL)、谷草转氨酶(ALT)和白蛋白(ALB)的水平，并观察其与肝功能Child-pugh[3]分级关系，从而探讨IL-6、IL-8、TNF-a升高程度与肝功能损害程度的关系。

　　1 材料与方法

　　1.1 研究对象：PHC患者58例，均为我院住院及门诊患者，其中男性35例，女性23例，年龄35～65岁，平均50±3.3岁，均经CT肝穿刺病理证实为肝硬化，乙型肝炎病毒血清标志物二对半除HbsAb外至少二项阳性。按Child-Pugh肝功能分级标准，A级组l5例，B级组26例，C级组17例。所有患者均无动脉粥样硬化疾病、感染、高血压、慢性肾炎及其他肾脏病变。正常对照组35例，其中男性21例，女性14例，年龄30～64岁，平均48±2.3岁，系健康体检者，无心、脑、肝及内分泌代谢病。

　　1.2 方法：清晨空腹采集肘静脉血4ml，按常规分离血清，-20℃保存。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定IL-6、IL-8、TNF-a;血清TBiL、ALT、ALB使用美国贝克曼DXC800生化分析仪检测。试剂盒由北京市福瑞生物工程公司提供，均按说明书操作。

　　1.3 统计学处理：采用SPSS统计学软件，用t检验对各组数据进行比较，以均值±标准差±S表示，P<0.05为有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 PHC患者及正常对照组血清IL-6、IL-8、TNF-a水平的检测结果：PHC患者血清IL-6、IL-8、TNF-a的水平均明显高于正常对照组，差异具有统计学意义(P<0.01)， PHC组与正常对照组血清IL-6、IL-8、TNF-a水平的比较(±S，pg/ml)PHC组与正常对照组血清TBiL、ALT、ALB水平的比较表3 Child-Pugh A、B、C三组IL-6、IL-8TNF-a水平的比较

　　2.2 PHC患者血清TBiL、ALT、ALB水平的检测结果：PHC患者血清TBiL、ALT的水平明显高于正常对照组，差异具有统计学意义(P<0.01)，而ALB水平则明显低于正常对照组，差异具有统计学意义(P<0.01)。

　　2.3 肝功能Child-Pugh不同分级:PHC患者血清IL-6、IL-8、TNF-a水平的检测结果：Child-Pugh A、B、C三级的IL-6、IL-8、TNF-a水平依次递增，且各级间差异有统计学意义(P<0.01)。

　　3 讨 论

　　细胞因子是一类由多种细胞产生的具有免疫活性的小分子多肽。在炎症和免疫反应过程中起重要作用。近年来研究表明，IL-6、IL-8及TNF-a主要由单核细胞和巨噬细胞产生，与肝脏局部炎症反应有关，参与炎性损伤过程，IL-6具有刺激细胞生长，促进细胞分化和加速肝细胞急性期蛋白合成的作用。细胞因子的作用方式主要为自分泌作用或旁分泌作用，具有激活诱导T、B细胞分化，增强NK细胞杀伤靶细胞，促进吞噬等功能。在中国人发生肝硬化过程中，IL-6水平的升高与肝脏对细胞因子的清除能力下降有关，而它的产生维持不变。IL-8是一种趋化因子，具有趋化和激活中性粒细胞的作用，在与中性粒细胞积聚有关的炎症中，局部或血清IL-8水平往往增高。慢性肝硬化患者血清IL-8水平升高可能与肝组织内IL-8合成增多有关[4]。在正常情况下，门静脉系统和体循环中细胞内毒素主要由肝脏清除。而在病理状态下，由于乙肝病毒的侵袭感染，机体免疫调节能力紊乱，致使机体细胞因子网络失调，引起细胞因子的过度分泌与表达。有文献证实[5]：在肝病患者中TNF-a、IL-6处于一种高活性状态，并与肝细胞损伤、病情的严重程度密切相关。肝脏内的kupfer细胞(肝内定居的单核巨噬细胞)是产生TNF-a的主要细胞，在内毒素的作用下，kupfer细胞释放TNF-a、IL-6、IL-8、内皮素、PAF等，其中TNF-a在肝组织损伤过程中起关键与核心作用。血清TBiL、ALT、ALB水平是反应肝细胞损害程度的指标。本文结果显示：PHC患者血清中IL-6、IL-8及TNF-a的水平明显高于正常对照组，且其血清TBiL、ALT的水平明显高于正常对照组，而ALB水平则明显低于正常对照组，差异均具有统计学意义(P<0.01)，表明肝脏受到病毒损害时肝脏内存在着IL-6、IL-8、TNF-a的过度分泌与表达，从而导致肝内内皮细胞、纤维母细胞增殖，肝脏内微循环障碍。同时在其它化学因子的共同参与下激活肝脏星形细胞，致使细胞外间质合成分泌增加，从而导致形成肝纤维化[6]。肝纤维化继续发展便导致肝硬化。本组资料也表明：PHC患者随着Child-Pugh分级，血清中IL-6、IL-8、TNF-a水平依次递增，这提示IL-6、IL-8、TNF-a水平升高程度与肝细胞损害有关。

　　综上所述，IL-6、IL-8、TNF-a在肝硬化患者损害中不仅介导肝细胞损伤，而且随着血清水平的升高而使肝脏损伤程度加重，提示肝硬化患者免疫功能有障碍，而这种障碍与肝硬化患者肝功能状态密切相关。因此采用IL-6、IL-8和TNF-a作为临床判断肝脏损害程度的指标具有较好的临床参考价值。

　　【参考文献】

　　[1] Maher JJ.Interactions between hepatic stellate cells and the immune system[J].Semin Liver Dis，2001，21(3)：417-426.

　　[2] Davenport A，Fernando RL，Robson R，et a1.Nitric oxide production by human peritoneal mesothelia cells[J].Int Artif Organs，2004，27(1)：l5-23.

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　　[4] Zhu JS，Da W， Wang L，et al.Correlative study between portal blood influsion and esophageal motility in chronic hepatic disease[J].World Gastroenterology，2001，6：1468-1469.

　　[5] 陈晓红，何有成，周元平，等.TGF-β1、TN-α及IL-6与肝纤维化的关系[J].上海免疫学杂志，2001，21(6)：364-368.

　　[6] 高玉洁，杨志才，南春红，等.HBV-DNA与TGF-β1、TN-α在慢性乙型肝炎中表达的影响[J].放射免疫学杂志，2004，17(1)：16-19.